什么是科勒照明，为什么它很重要，怎么做?

当你观察显微镜时，你是否会遇到光照不均匀的问题?如果是这样，你可能需要调整你的显微镜的程序“科勒照明”．听起来复杂吗?不要担心，阅读这篇文章，我们将逐步向您展示如何做到这一点。

本文将介绍

什么是科勒照度?

光学显微镜通过可见光与标本的相互作用产生放大图像。在显微镜中，标本的光照是获得高质量图像的最重要的变量。然而，我们的显微镜使用的光源(即卤素灯)是不均匀的。如果不进行调整，中心的光强将比外围区域强得多。因此，视场的边缘会变得昏暗，就像在阴影下一样。

[在这张图中]一个不均匀照明的例子。
图片来源:https://academic.oup.com/labmed/article/28/11/719/2503687

为了解决这个问题，Carl Zeiss公司(没错，就是今天卖高端相机和显微镜的公司)的August Köhler首先引入了一种叫做“Köhler照明”的方法。科勒照明确保样品的照明均匀。这减少了图像伪影，并提供了高样本对比度。

如果你对它的光学原理的细节感兴趣，请看这个链接．

Köhler照明需要几个光学元件才能起作用。大多数常规的复合显微镜与阿贝冷凝器和虹膜应该能够做到这一点。

这些组件依次位于光源和试样之间，以控制试样的照度:

1.集电极镜头和/或场镜——从光源收集光线，并将其聚焦在冷凝器膜片的平面上。

2.场隔膜-控制来自集热器镜头的光束大小。

3.冷凝器膜片-控件的大小光束进入聚光镜。

4.聚光透镜-投射光束，不聚焦它，通过s样品。

[在这张图中]Köhler照明示意图。
图片来源:https://en.wikipedia.org/wiki/K%C3%B6hler_illumination

所有现代显微镜制造商都推荐这种技术，因为它工作非常好。让我们学习如何校准“科勒照明”，以实现您的显微镜的全部潜力。

请注意

a.你可能需要建立科勒照明每次你改变物镜。

b.此程序适用于所有显微镜。所有需要调整的部件都在“垂直显微镜的级以下”或“倒置显微镜的级以上”。

[在这张图中]直立显微镜下的冷凝器/膜片部分是我们需要调整为科勒照明的地方。这个例子是卡尔蔡司的Primo Star实验室显微镜。

[在这张图中]你将在显微镜下看到的每一步科勒照明。

1.将冷凝器的炮塔旋转到亮场光圈处，光圈应该是打开的，不能安装滤光片或棱镜。

2.选择合适的标本(染色良好的亮场标本，如非常薄的动物或植物组织)。

3.用透射光聚焦你的标本。

4.(上图中的图像A)关闭光阑，你应该会看到一个八角形的光圈出现(或者如果它真的严重失焦，整个图像将变得更暗)。关闭光圈，直到它占据70%的视野。

5.(图B)用整个冷凝器升高/降低的旋钮聚焦冷凝器，应使其八角形尽可能尖锐。

6.(图C)用两个定心螺钉将八边形移动到视场的近似中心点。

[在这张图中]通过调节两个定心螺钉对中冷凝器。
图片来源:蔡司．

7.(图D)打开横膈膜，照亮90%的视野。通过微调定心螺丝将八角形定心。

8.(图E)打开膜片，直到它刚好照亮整个视图或相机区域。

9.调整冷凝器光圈，使图像对比度好。

享受你在重组显微镜下的探索吧!

是的，样品的均匀照明对于先进的照明技术，如暗场、相位对比和差分干涉对比(DIC)显微镜也是至关重要的。