(更新6/07/2020)
本文将介绍
什么是血细胞计
血细胞计是一种计数室设备，最初设计用于计数血细胞(“hemo”的名称意为血液)。血细胞计就像一个厚的标本载玻片上面刻有网格。当盖套放在血细胞计上时，盖套将样本固定在特定的高度(通常为0.1毫米)。
网格也有特定的尺寸，因此可以计算出室内的体积。由于可以计算网格区域内的细胞数量，且体积已知，因此可以很容易地确定样品中细胞的浓度。下图是血细胞计的图解。
如何使用血细胞计来计数细胞
- 准备样品
在取样品前将样品充分混合。避免团。
- 进行适当的稀释
细胞浓度不宜过高或过低。如果细胞浓度过高，在显微镜下很难目视计数细胞。如果单元格浓度过低，您需要计数更多的方格，可能需要数更多的次数，以避免统计错误。如果细胞浓度过高，尝试进行1:10,1:100,1:1000的连续稀释(见下图)。
- 介绍细胞悬液
将罩子盖在计数面上。用细尖移液管从封面边缘引入细胞悬浮液(10 μL或1滴)。毛细管力将把液体拖满盖套下面的区域。应加入足够的液体，使计数面刚好覆盖。
- 细胞计数
使用显微镜，用5-10倍物镜聚焦计数区域的网格线。计数单元格在一组16平方(1×1毫米平方面积;蓝色区域)。你应该设置一个计数规则。
例如，计算一个正方形的顶部和左侧行(用绿线标记)上的单元格，但不要计算底部和右侧行(用红线标记)上的单元格。将血细胞计移动到下一组16个角方格，并继续计数，直到计数完所有4组16个角方格。以下图为例，4组16个方格的单元数分别为3,5,6,4。因此，本次计数的平均单元数为(3+5+6+4)/4 = 4.5
- 计算细胞浓度
要计算每毫升的细胞数:从16个角方格的每组中取平均细胞数。乘以10000。如果没有稀释，最终值是原始细胞悬浮液中的细胞数/毫升。在本例中，上面计算的平均单元格数是4.5，然后乘以10,000。因此，4.5* 10000 = 45000。浓度为45000细胞/mL。如果这是10倍稀释，你需要乘以10;让它回到45万个细胞/毫升。
你也可以观看演示视频在这里．
如何使用血细胞计来测定细胞活力
台盼蓝是一种用来区分活细胞和死细胞的染料。这是一种重要的染色剂，它不会被健康的活细胞吸收，但会使细胞膜受损的细胞产生染色。因此，只有死细胞才能被染成蓝色，在显微镜下才能看到。这种方法称为染料排除法。
为了确定细胞活力，我们使用与细胞计数相同的方法。唯一的区别是，在将细胞悬浮液引入血细胞计之前，需要将细胞悬浮液与台盼蓝染料混合。让我们开始!
1.进行适当的稀释
就像我们上面讨论的，适当的稀释会让你的计数更容易。细胞过多或过少都不利于计数。
2.将等体积的细胞悬浮液与台盼蓝染料混合
台盼蓝的浓度为0.4% (w/w)。工作浓度为0.2%;这就是我们将等量细胞悬浮液与等量0.4%台盼蓝混合的原因。记住你的细胞浓度现在被稀释了2倍!
3.介绍细胞悬液
将罩子盖在计数面上。用细尖移液管从封面边缘引入细胞悬浮液(10 μL或1滴)。等待1分钟，让细胞沉淀。
4.计算细胞活力
使用显微镜，用5-10倍物镜聚焦计数区域的网格线。现在你可以看到一些细胞是透明的，有光泽的，圆形和光滑的形状。这些是健康的活细胞。你还可以看到一些细胞内部是蓝色的，它们的形状有一个非常粗略的轮廓。这些是不健康的死亡细胞。在你有信心区分它们之后，你就可以开始计算活细胞和死细胞的数量。
让我们以下图为例。
活细胞(白色细胞)的计数为(2,5,5,3)在4个浅蓝色正方形中。
平均活细胞数为(2+5+5+3)/4 = 3.75。
死亡细胞(蓝色细胞)的计数是(1,0,1,1)在4个浅蓝色方格中。
死亡细胞的平均数量为(1+0+1+1)/4 = 0.75
因此，细胞活力的计算公式为:
[活细胞/(活细胞+死细胞)]:3.75 /(3.75+0.75)= 0.83，即83%。
你也可以计算活细胞和死细胞的数量。本例中活细胞数为3.75*2(稀释因子)*10,000 = 75,000个细胞/mL。
死亡细胞数为0.75*2(稀释因子)*10,000 = 15,000个细胞/mL。
血细胞计数器的应用程序
估计细胞大小
因为网格有一个特定的尺寸，一些线之间是0.25毫米;有些线之间是0.05毫米(见下图)。因此，您可以很容易地估计单元格的大小。如果你想更精确地确定细胞的大小，你可以在显微镜下拍照。然后，使用图像J等软件，你可以告诉软件“一个固定的长度等于1毫米”。它将为您转换和计算单元格的大小。
进行血细胞计数
血细胞计最初是为血细胞计数而设计的。我们的血液由红细胞、白细胞和血小板组成。每个细胞类型的细胞数量和组成可以告诉医生你的身体健康状况。例如，红细胞数量低会导致疲劳感和虚弱感(贫血)。白细胞数量的增加可能预示着感染、过敏、炎症或其他疾病。因此，血细胞计是医学测试实验室中非常重要的工具，因为它能够计算细胞的数量和每种细胞类型的组成。
进行细胞培养的细胞计数
当我在实验室培养细胞时，我需要每隔几天更换一次细胞培养基(取决于细胞生长的速度)。当粘附细胞生长到占据一个培养皿表面95%的面积后，就到了将细胞“传代”到另一个培养皿的时候了。我们要做的是分离细胞，制成均匀的悬浮液，然后计算细胞的数量。细胞的数量对细胞培养非常重要。如果培养皿中的细胞太少，细胞可能生长不好或死亡。因此，计算细胞数量的能力是细胞培养的一项基本技能。
哪里可以买到血细胞计
亚马逊是一个很好的开始。你可以在亚马逊上找到各种不同价格和质量的血细胞测量仪。Rs“科开云体育全站app下载安装学还提供了一个“all in one kit”与一个血细胞计数器、盖玻片、台盼蓝和亚甲基蓝用于评估细胞活力和样品小瓶、细尖转移移液管、透镜纸小册子。所有你需要开始的东西都在一个工具包里。
